LABORATORIO DE MICROSCOPIA

LABORATORIO DE BIOLOGÍA  GENERAL

Guía de Laboratorio

Tema: Metodología  de trabajo del Microscopio en el Laboratorio

 Método de trabajo:

Antes de empezar a definir la forma de trabajar con un microscopio compuesto, hay que tener claras las partes del mismo y cómo funcionan esas partes, solo de esta forma se podrá emplear correctamente el mismo.  Antes de hacer un enfoque se debe de conocer el concepto de posición de trabajo o posición de empleo. 

Esta posición es la que debe presentar el microscopio antes y después de usarse.  

La posición de trabajo permite que las piezas del microscopio no se desajusten mientras el mismo no se esté usando, además a partir de la misma es que se empieza a enfocar correctamente.   Por lo tanto es muy importante que Ud. sepa para qué se emplea la posición de trabajo y que la utilice siempre al final de cualquier sesión de práctica en que se emplee un microscopio.  La posición de trabajo consiste en lo siguiente: 

Microscopio apagado. Asegúrese de que el  interruptor del microscopio  se encuentre en " apagado ".

El tornillo de la caja de prismas debe encontrarse ajustado 

La Platina debe encontrarse abajo, con el carro en el centro.

Lente objetivo en bajo poder. 

Para poder trabajar correctamente con su microscopio asegúrese de seguir las siguientes recomendaciones. 

a.   Coloque el microscopio sobre la mesa de trabajo. Cuando tome el microscopio para trasladarlo de un lugar a otro hágalo cuidadosamente, usando ambas manos, con la derecha tome firmemente el brazo y ponga la izquierda bajo la base.  Nunca lo arrastre, si necesita correrlo un poco deberá igualmente levantarlo por completo.  La vibración que produce el arrastrarlo desajusta algunos de los mecanismos ópticos.

b.   Antes de usar el microscopio, observe si todas sus partes se encuentran limpias y en buen estado. Cualquier daño debe ser reportado inmediatamente a su  profesor. 

c.   Revise que el lente objetivo de bajo poder esté en línea, sino entonces, gire el revólver hasta que el lente quede de esa manera.  Reporte a su instructor la mala posición del microscopio si no se encontraba correctamente. 

d.  Encienda la luz y ajuste el diafragma con la abertura cerrada.  La luz debe permanecer apagada mientras el microscopio no esté en uso.  La cantidad de luz, regulada mediante el  diafragma, debe ser directamente proporcional al aumento empleado.  Recuerde que este es el control principal de la luz del Microscopio.

e.   Mire por el lente ocular y revise que  todo el campo óptico este iluminado.  Si el ocular y los objetivos se encuentran sucios,  llame a su profesor para que él proceda a limpiarlos con un trozo de tela especial.  Si aún sus lentes permanecen  sucios, consulte a su profesor, pues los lentes se deberán tratar con sustancias especiales a fin de limpiarlos más profundamente.

f.   Coloque la preparación a estudiar sobre la platina, asegúrese de que esté bien colocada y sujeta con las pinzas del carro.

g.   Una vez hecha la observación y antes de quitar la preparación, coloque el lente objetivo en bajo poder y luego proceda a bajar la platina antes de retirar la lámina.

h.   Asegúrese de que el microscopio esté limpio y en posición de trabajo antes de entregarlo al concluir sus observaciones. 

¿ CÓMO ENFOCAR CORRECTAMENTE CON EL MICROSCOPIO ?

 Coloque la preparación sobre la platina del microscopio y sujétela con las pinzas del carro

Mueva los tornillos del carro 

 De tal forma que la porción del portaobjetos que contiene la preparación quede sobre la abertura circular de la platina en donde se observará el condensador.

Mueva la preparación hacia el lente objetivo de bajo poder con la perilla del macrométrico (enfoque grueso) hasta que observe una imagen más o menos nítida. Para ajustar esa imagen utilice la perilla del micrométrico (enfoque fino ).

 Ahora ha hecho un enfoque en bajo poder.  Para pasar a mediano poder, solamente mueva el lente objetivo, recuerde a la hora de cambiar de lente objetivo solamente girar del revólver, si la imagen se desajustó, enfoque de nuevo con la perilla del micrométrico, pero NO utilice la perilla de macrométrico porque quiebra la preparación. 

Para pasar a alto  poder se vuelve a girar el revólver y se ajusta con el micrométrico.  La perilla del macrométrico se utiliza solamente en bajo poder. Para desenfocar debe hacerse lo contrario (primero girando el lente hasta bajo poder y luego bajando la platina) recuerde que el macrométrico sólo se puede usar cuando el microscopio de encuentra en la lente de bajo poder.  La lente de inmersión en aceite solo se utiliza si se cuenta con el aceite especial que le permite funcionar. 

DISTANCIA DE TRABAJO

La Distancia de Trabajo es la distancia que existe entre la lente objetivo y la lámina, cuando esta se encuentra enfocada.   La distancia de trabajo disminuye conforme se utilice más amplificación en el microscopio, es por esto que no deberá utilizarse el macrométrico (enfoque grueso) en mediano poder, alto poder o con la lente de inmersión en aceite, pues la distancia de trabajo es tan corta que se puede quebrar la lámina, además de que se desenfocaría demasiado.

Comparación de la distancia de trabajo en la lente de bajo poder, mediano poder y alto poder 

Para retirar la lámina

Ud. tiene le microscopio en un enfoque en alto, o mediano poder, para poder retirar la lámina debe hacer lo contrario que cuando enfocó, es decir deberá girar el revólver hasta el lente e bajo poder y luego utilizar el macrométrico  para bajar la platina.  Con la platina abajo, cierre el diafragma, abra las pinzas del carro y luego retire la lámina.

Manejo de la luz

Del adecuado manejo de la luz depende que se pueda observar bien la preparación, para esto recuerde que debe empezar en la potencia aproximadamente a un 80% de la bombilla, con la lente de bajo poder y el diafragma cerrado en el mínimo posible para ello, use el regulador de luz.  Conforme se va aumentando la amplificación debe irse incrementando la cantidad de luz.  Recuerde que el dispositivo que permite esto es el diafragma.  

Las luces muy fuertes causan deslumbramiento que al final es el causante de una enfermedad del ojo llamada ceguera nocturna.  Si el microscopio no se está usando deberá apagarse la luz.

  

PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Y SU FUNCIÓN

En esta ocasión vamos a ir conociendo las distintas partes del microscopio óptico así como la función de cada una de ellas 

Partes mecánicas. 

Lentes Oculares: sirven para hacer la observación y son los por los cuales hay que mirar los objetos, normalmente poseen un aumento de 10X.  No deben tocarse con los dedos o limpiarse, para esto el encargado del equipo deberá hacerlo tomando los cuidados necesarios para no rayarlos o mancharlos.

En los microscopios binoculares (dos oculares) hay un mecanismo que permite separarlos para ajustarlos a la separación de los ojos de cada usuario.

Para observar por los lentes oculares se deberá tener ambos ojos abiertos, aunque el microscopio sea monocular (un solo ocular).

El tubo óptico se une a la Caja de Prismas, en la cual hay un prisma quien es el que se encarga de desviar la imagen que se recibe desde el lente objetivo hacia el lente ocular formando un ángulo de 120 grados. El tubo óptico tiene como función soportar los oculares.

Esta es la razón por la cual no se debe arrastrar o golpear el microscopio a la hora de movilizarlo, pues estos prismas de pueden mover se su posición, la cual es la que permite el enfoque.  Obsérvese que el tornillo de la caja de prismas se puede aflojar y con esto se consigue que la misma se pueda girar, con la finalidad de permitir a otras personas observar sin mover el microscopio.

El tornillo se debe aflojar suavemente, nunca hay que girarlo demasiado pues se puede soltar, basta girarlo un cuarto de vuelta. 

Siempre es importante que este tornillo quede ajustado cada vez que se mueve la caja de prismas, pues la misma se puede caer.   Igualmente, luego de utilizarlo hay que cerciorarse de que el mismo quede ajustado, para evitar que esta parte del microscopio se mueva y se produzca un accidente.

El brazo del microscopio, sirve para transportarlo y soportar algunas piezas como el tornillo macrométrico (para enfoque grueso) y el tornillo micrométrico (para enfoque de precisión).  

La platina es una placa metálica con una perforación central sobre ella se coloca la preparación que se va a observar.

Generalmente posee un par de pinzas para sostener la lámina y un sistema mecánico denominado carro. El Carro a veces posee dos escalas que permiten fijar una determinada estructura en la preparación observada, como se ve en la fotografía anterior, esto se logra por medio de la utilización de coordenadas (como en un mapa).   El Carro, también posee dos Tornillos que se utilizan para mover la preparación de derecha a izquierda y de adelante hacia atrás.

El revólver se encuentra en la parte inferior del tubo óptico y en él se encuentran los lentes objetivos, en los microscopios ópticos puede haber tres o cuatro de estos lentes objetivos. Estos lentes presentan diferente aumento.

Lente Bajo Poder: Generalmente 4X

Lente Mediano Poder: Generalmente 10X

Lente Alto Poder: Generalmente 40X

Lente Inmersión en aceite: 100X

El condensador: se encuentra debajo de la platina y su función es la de soportar las lentes que recogen los rayos luminosos.

La base, sirve para darle estabilidad al instrumento. En ella generalmente se encuentran ubicadas la fuente de Luz .

AJUSTES DE ENFOQUE

Para enfocar la lámina o la preparación  existen dos perillas o tornillos, ( Macrométrico y Micrométrico ) las cuales realizan lo mismo básicamente.  Su función es hacer subir la platina hasta alcanzar la distancia de trabajo o distancia de enfoque, la diferencia es la magnitud en la que ambas funcionan.  El macrométricoo se utiliza exclusivamente con la lente de bajo poder, pues mueve en forma apreciable la platina, muientras que el Micrométrico se utiliza en cualquier amplificación.

PARTES ÓPTICAS

Lente ocular: Esta se compone de dos lentes. La lente inferior recoge la imagen del objetivo, la reduce y la reforma dentro del ocular a nivel del limitador del campo visual. La lente superior forma una imagen virtual aumentada para ser vista. El aumento de los oculares oscila normalmente entre X5 y X15.

Lente objetivo es el lente más importante del microscopio la que controla la amplificación posible y la resolución de la imagen. Todos los objetivos se acoplan a los microscopios mediante roscas estándar y pueden ser cambiadas de un microscopio a otro independientemente de su marca.

Los aumentos más utilizados son: 5X,10X,20X,40X y 100X. Si examinamos un objetivo observamos que hay cifras grabadas por ejemplo: 40X / 0,70:160/ 0,17 en donde: 40X es el aumento del objetivo y 0,70 es la abertura numérica, es decir la medida del tamaño del cono de luz que el objetivo puede admitir, 160 es la longitud en mm del tubo ocular que debe ser utilizado con ese objetivo, 0,17 es el espesor del cubre objeto (en mm) que debe utilizarse con ese objetivo. 

El condensador es la lente que ilumina la lente del objetivo, su abertura numérica debe ser suficientemente alta para suministrar el cono de luz requerido. 

En la parte inferior del condensador hay una abertura regulable, o diafragma controlado por una palanca lateral. 

  

Hay también un anillo para alojar filtros coloreados o de luz natural.

OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS:

Microscopio de Contraste de Fases.

Su sistema está compuesto por lente ocular, anillo de fases, lente del objetivo, lente del condensador y diafragma anular. Tiene una amplificación de 1,000 a 2,000 nm. Permite observar estructuras muy difíciles de distinguir. No requiere de una tinción.

Microscopio de Fluorescencia.

Se compone de un primer filtro de corte o filtro de excitación, espejo dicroico, segundo filtro de corte o filtro de emisión, fuente de iluminación y condensador.

Microscopio de Interferencia.

Es un instrumento que permite la medida de la masa de regiones pequeñas y transparentes de células vivas, obteniéndose datos de tipo cualitativo y cuantitativo. Sus componentes son analizador rotable, un cuarto de longitud de onda, objetivo de interferencia, condensador, polarizador y filtro de interferencia.

Microscopio Electrónico de Barrido.

Está compuesto por un cañón de electrones (ánodo, cátodo y electroimán), sistema de barrido y de lentes. Su resolución depende de la cantidad de electrones emitidos, contando así con un límite de    resolución. Tiene una amplificación de 100,000 a 200,000 veces y una alta resolución en 3D.

Microscopio Electrónico de Transmisión.

Está compuesto por cañón electrónico, lente condensadora, cámara de muestra, lente objetiva, lente intermedia, proyector, pantalla fluorescente y cámara (placa fotográfica). Utiliza electrones con una longitud de onda de 0.5 Å. Proporciona un aumento de las células de 100, 000 veces aproximadamente.(4) 

CUESTIONARIO

1) ¿Cuál es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?

2) ¿Qué importancia tiene el uso del microscopio en la Biología Celular?

3) ¿Por qué es necesario utilizar aceite de inmersión al utilizar el objetivodel mismo nombre?

4) ¿Qué significa resolución, poder de resolución y amplificación, asímismo de qué factores depende cada uno de ellos? Presenta tusrespuestas a manera de tabla.

5) Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios incluyendo: fuente de iluminación, condensador, longitud de onda, tipode tinción, resolución, amplificación, tipo de lentes, etc.